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離心機分離實例一

2009-05-18 [2064]

    豬腎中微粒體膜組分粗品的分離

      儀器與試劑

      1.超速離心機(冷凍離心機)和轉(zhuǎn)頭

      2.勻漿緩沖液。50m mol/L Hepes/NaOH (pH7.4),0.33mol/L蔗糖。

       3.重懸緩沖液。10m mol/L Hepes/NaOH (pH7.4)。

      方法

       1.使用韋林?jǐn)嚢杵鳎ㄒ?℃預(yù)冷)在10倍體積(1L)的勻漿緩沖液(要求4℃預(yù)冷),中破碎100g豬腎皮質(zhì)。

        2.將勻漿物在離心機中于8000×g離心15min;

         3.小心地轉(zhuǎn)移出上清液,并將其在26000×g離心2min;

          4.用重懸緩沖液(要求4℃預(yù)冷)重懸離心得到的微體沉淀至蛋白質(zhì)終濃度約為10mg/ml。這樣得到的微粒體沉淀重懸物就是膜結(jié)合蛋白質(zhì)的來源

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